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    產(chǎn)品分類Product categories
    首頁 > 技術(shù)文章 > PCR儀實驗過程碰到這些問題,應(yīng)該怎么辦
    PCR儀實驗過程碰到這些問題,應(yīng)該怎么辦
    基因擴增儀主要用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴增等。
    光學檢測系統(tǒng):
    1、光源:五個LED,各LED激發(fā)波長不同,保證每個通道的熒光素由優(yōu)質(zhì)的激發(fā)光激發(fā)
    2、探測器:CCD,確保整板同時檢測,數(shù)據(jù)間可比性強
    3、激發(fā)波長范圍:475nm-640nm
    4、發(fā)射波長范圍:520nm-740nm
    5、五個檢測通道:可同時能做四色檢測
    6、線性范圍:11個數(shù)量級
    7、靈敏度:可檢測到單拷貝
    PCR儀部分:
    1、半導(dǎo)體模塊加熱制冷
    2、樣品容量:96孔
    3、升溫速率:>5℃/秒,降溫速率>4.5℃/秒
    4、溫度精度:+/- 0.25℃
    5、溫度均一性:溫度均一性:≤±0.3℃
    6、溫控范圍:4℃-99.9℃
    7、熔解曲線檢測時,升降溫速率可到0.01℃/sec可調(diào)
    8、熱蓋溫度:30℃-110℃可調(diào)
    擴增產(chǎn)物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺:
    常見的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系,與反應(yīng)起始時RNA的總量及純度有關(guān),建議在試驗中加入對照RNA。
    第一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進行PCR擴增時,在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10,建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級結(jié)構(gòu),如環(huán)狀結(jié)果,有可能導(dǎo)致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無法從此引物進行有效延伸。
    目的mRNA中含有強的轉(zhuǎn)錄中止位點,可以試用以下方法解決:
    a.將第一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。
    b.使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進行第一鏈反應(yīng)。
     

    上海睿玥實驗器材有限公司主營產(chǎn)品:全自動熔點測定儀,梯度PCR基因擴增儀,平行反應(yīng)合成儀
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